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蛋白質組學服務

名稱:蛋白質組學服務
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.蛋白質組學服務

     蛋白質組學(Proteomics)是指利用高分辨的蛋白質分離技術和高效的蛋白質鑒定技術在蛋白質水平上整體性、動態和定量地研究生命現象及規律的科學,是係統生物學的有機組成部分。亚游电子游戏生物可為客服提供業內領先的蛋白質組學服務,包括蛋白質組定性、iTRAQ/TMT/Label-free蛋白質組定量、外泌體蛋白質組定量、蛋白質組修飾分析等。

.蛋白質定性分析

     質譜技術具有強大的蛋白質定性能力,無論是細胞、血清、上清等複雜蛋白質組組,還是IP/Co-IP/pull-down等蛋白質產物,隻要被鑒定物種有基因組序列信息,質譜技術即可獲得樣品中蛋白質及蛋白修飾的定性信息。

樣本要求:

1.  SDS-PAGE條帶:考染、銀染條帶清晰可見;

2.  可選擇特定分子量區域的條帶進行切割;

3.  如鑒定整條泳道蛋白質,則需將泳道切膠為6-8份,獨立酶解;

4.  蛋白質溶液:總量大於5μg,濃度大於0.1μg/μL,緩衝液不含NP40等去汙劑。

.蛋白質組定量分析

1.  iTRAQ/TMT 標記蛋白質組定量

     iTRAQTMT技術是目前運用廣泛的兩種定量蛋白質組學技術,每批次實驗最多可同時比較8例或10例樣本的蛋白質組,具有檢測平行度高、定量準確等優勢。

     iTRAQ技術是由美國AB SCIEX公司研發的一種多肽體外標記技術。iTRAQ試劑由三部分組成,可形成8種等量異位標簽,單批實驗可進行8例樣本的蛋白質組定量分析。一級質譜中,iTRAQ結合的同一多肽具有相同的質荷比。二級質譜中,iTRAQ平衡基團丟失,報告基團產生不同的報告離子信號強度,顯示樣品間相同肽段的定量差異信息。

TMT技術是由美國Thermo Fisher公司研發的一種多肽體外標記技術。在結構和檢測原理上與iTRAQ試劑類似。最多可進行10例樣本的蛋白定量分析。其中127/128/129/130四種標記試劑可以分別加載13C15N兩種異位標簽,與126131兩種標記試劑合並,可形成一套10標試劑盒。當待檢測的樣本數量8-10例時,TMT標記定量方法尤為適用。

2.  Label-free 非標記蛋白質組定量

蛋白質非標記定量技術(Label-free),無需對樣本進行標記,直接通過一級質譜對多肽和蛋白質進行半定量檢測。由於不受標記試劑的限製,Label-free技術更適合用於對大批量樣品進行平行比較的實驗,同時Label-free技術路線簡單,樣品損壞少,適用於微量樣品的檢測。 

Label-free主要通過比較質譜檢測肽段的一級譜圖峰麵積,分析不同樣品中蛋白豐度的變化.主要定量原理:以一級質譜(MS1 )為基礎,在保留時間軸上,同一個保留時間點可獲取多張MS1譜圖。在質荷比(m/z )軸上,顯示不同肽段被檢測到的值.在蟑強度軸上,崦麵積的大小間接反映肽段量的多少。最終利用Maxquant或者PD軟件分析三種參數,計算出多肽的定量信息。

樣本要求:

1.  細胞樣本:細胞數量達到5*10;

2.  組織樣本:組織濕量達到50mg;

3.  植物樣本:鮮嫩植物組織,濕量達到200mg;

4.  微生物樣本:OD600達到1h,菌體濕量達到200mg。

.外泌體蛋白質組定量

亚游电子游戏生物根據主流外泌體研究策略,開發了一套完整的外泌體蛋白質組學研究技術服務體係,以確保外泌體研究在同樣技術標準下獲得高質量研究數據。客戶隻需提供抽提好的外泌體或外泌體來源樣本,其餘所有實驗項目均由亚游电子游戏生物完成。

樣本要求:

1.  血清/血漿樣本:大於2mL;

2.  細胞上清樣本:大於150mL;

3.  尿液樣本:大於100mL;

4.  外泌體蛋白:大於100μg。

.蛋白質組修飾分析

磷酸化蛋白質組分析的目的在於鑒定樣品中發生磷酸化的蛋白質以及相應的磷酸化位點。而磷酸化蛋白的豐度通常很低,因此富集磷酸化蛋白和肽段是磷酸化蛋白質組研究的基礎。在酸性條件下,TiO2表麵帶正電,可與磷酸化肽段產生靜電作用而達到富集效果。TiO2iTRAQ/Label-free定量蛋白質組學技術的結合,可實現磷酸化蛋白質組的鑒定和定裏比較。

樣本要求:

1.  細胞樣本:細胞數量達到106;

2.  組織樣本:組織濕量達到100mg;

3.  微生物樣本:OD600達到1h,菌體濕量達到200mg;

4.  蛋白提取物:蛋白總量大於500μg,濃度大於1μg/μL。