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流式細胞技術

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點擊次數:2170 更新時間:2019年06月06日16:48:09 打印此頁 關閉

.實驗簡介及原理介紹

流式細胞技術(flow cytometry,FCM)是利用流式細胞儀進行的一種單細胞定量分析和分選技術。流式細胞術是單克隆抗體及免疫細胞化學技術、激光和電子計算機科學等高度發展及綜合利用的高技術產物。

.基本結構

流式細胞儀由三部分構成

1.液流係統,包括流動室和液流驅動係統;

2.光學係統,包括激發光源和光束收集係統;

3.電子係統,包括光電轉換器和數據處理係統。流式細胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經熒光標記的細胞或微粒逐個通過樣品池,同時由熒光探測器捕獲熒光信號並轉換成分別代表前向散射角、側向散射角和不同熒光強度的電脈衝信號,經計算機處理形成相應的點圖,直方圖和加三維結構圖像進行分析。

用於FCM的樣本是單細胞懸液,可以是血液、懸浮細胞培養液、各種體液、新鮮實體瘤的單細胞懸液以及石蠟包埋組織的單細胞懸液等。

.基本原則

1.使各種液體和懸浮細胞樣本新鮮,盡快完成樣本製備和檢測;

2.針對不同的細胞樣本進行適當洗滌、酶消化或EDTA處理,以清除雜質,使粘附的細胞彼此分離而形成單細胞狀態;

3.對新鮮實體瘤組織可選用或聯用酶消化法,機械打散法和化學分散法來獲得足夠數量的單細胞懸液;

4.對石蠟包埋組織應先切成若幹40-50um厚的蠟片,經二甲苯脫蠟到水後,再用前述方法製備單細胞懸液;

5.單細胞懸液的細胞數不應少於10000個。

.流式細胞技術的應用:

1.其測定細胞內DNA的變異係數最小,一般在2%以下;

2.能準確地進行DNA倍體分析;

3.借助於熒光染料進行細胞內蛋白質和核酸的定量研究;

4.快速進行細胞分選和細胞收集;

5.醫學應用:免疫功能研究各種幹細胞的檢測,癌症病人的多藥耐藥性,細胞功能及代謝動力學研究,血小板分析(心血管疾病),流式細胞術與分子生物學研究;

6.應用於外周血內皮細胞測定、調節性T細胞等尖端領域。

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